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新项目介绍——GeneXpert?系统用于结核杆菌和艰难梭菌检测
我中心引进了美国赛沛GeneXpert分子诊断系统,目前运用此系统的实时荧光PCR快速检测方法开展了结核分枝杆菌及其耐药基因和艰难梭菌毒素快速检测两项,用于临床辅助诊断,可以帮助提高临床诊断和治疗水平。标本采集及开具申请单有哪些注意事项呢?
一、结核分枝杆菌DNA检测
1.意义:肺结核的传染性,快速、准确的诊断是结核预防、控制和治疗的重要因素,正确使用抗结核药通常对结核治疗效果显著。结核分枝杆菌及与利福平耐药性相关的rpoB基因突变的分子检测大大加快了结核、耐药结核,以及耐多药结核的诊断。
2.检测目的:主要体外定性检测痰液中的结核分枝杆菌复合群DNA和利福平耐药相关的rpoB基因突变。
3.标本采集及运送要求:无菌带盖容器送检,标本类型、采集要求和运输保存条件见表1。
表1:标本类型、采集要求和运输保存条件
结核类型
样本类型
采样标准
运输保存条件
肺结核
痰液A
1.5-4mL痰液,漱口后取痰,
避免唾液,食物残渣
35℃以下保存3天,
2-8℃保存10天
支气管吸出痰A
1.5-4mL吸出痰
35℃以下保存3天,
2-8℃度保存10天
肺泡灌洗液A
3-5ml
2-8℃保存7天
淋巴结核
淋巴结/淋巴抽吸A
穿刺取淋巴结组织
2-8℃保存7天
结核性脑膜炎
脑脊液A
3-5ml
2-8℃保存7天
骨结核
脓液(骨关节)A
1mL骨关节脓液
2-8℃保存7天
多种结核
新鲜组织A
穿刺取新鲜组织
2-8℃保存7天
儿童结核
洗胃液A
5-20ml
2-8℃保存7天
肾结核
尿液B
20mL尿液
2-8℃保存7天
肠结核,儿童结核
粪便B
0.6g新鲜粪便
2-8℃保存7天
结核性胸膜炎/
腹膜炎
胸腹水B
20mL胸腹水,10ml
EDTA抗凝管两管
2-8℃保存7天
备注:A为首选样本,B为次选样本。胸腹水、肺泡灌洗液、脑脊液建议不少于3-5ml,足够离心的量最优。
4.检测结果:基于样品中结核分枝杆菌的Ct值,结果将以高、中、低或非常低来显示,只有在检测到结核分枝杆菌的情况下,才显示利福平耐药的检测结果(a检测到利福平耐药rpoB基因突变;b未检测到利福平耐药rpoB基因突变;c利福平耐药不确定:结核分枝杆菌的浓度非常低,不能确定是否耐药。)
5.门诊和住院医嘱申请流程(见下图):
门急诊医嘱:
住院医嘱:
6.结核分枝杆菌ropb基因和突变检测收费元,医保全自付。
二、艰难梭菌DNA检测
1.意义:艰难梭菌感染(CDI)后容易引起从腹泻到严重危及生命的假膜性结肠炎。艰难梭菌的主要毒力因子是肠毒素A和细胞毒素B。艰难梭菌诊断传统上是基于毒素A或B的检测,PCR检测方法的灵敏度和特异性均比以往的细胞毒试验和免疫分析方法高。
2.检测目的:体外定性检测疑似艰难梭菌感染(CDI)病人的产毒型艰难梭菌B(tcdB)毒素基因。
3.标本采集及运送要求:腹泻病人不成形粪便样本至少1g;对疑似艰难梭菌引起的肠梗阻的病人可用肛拭子取样;无菌带盖容器立即送检;如不能及时送检,室温(20-30℃)24小时,冷藏(2-8℃)5天。
4.检测结果:艰难梭菌毒素阳性(检测到产毒性艰难梭菌的DNA序列(毒素B));艰难梭菌毒素阴性(未检测到产毒性艰难梭菌的DNA序列(毒素B));无效(不能确定是否存在艰难梭菌靶向DNA,需要重新进行测试)。
5.门急诊和住院医嘱申请流程(见下图):
门急诊医嘱:
住院医嘱:
6.艰难梭菌核酸检测收费元,医保全自付。
三、提示
GeneXpert?系统除对结核分枝杆菌及其耐药基因和艰难梭菌毒素快速检测外,还可以进行碳青霉烯耐药基因检测、沙眼衣原体(CT)/淋球菌(NG)DNA检测、甲型/乙型流感及呼吸道合胞病毒(RSV)RNA检测、人类免疫缺陷病毒(HIV-1)RNA检测、金黄色葡萄球菌和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)DNA检测。
如临床有需要,欢迎与检验医学中心微生物室联系,联系人:赵艳丰,。
撰稿:王欣慧
审核:朱叶飞
编辑:王 鹏
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